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        SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標準蛋白質

        更新時間:2012-04-11點擊次數:2228

        本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標準蛋白質,使用方便,效果尤佳。其分子量范圍是14400~97400道爾頓。
        成分:
        成分 分子量(道爾頓) 含量(μg/支)
        兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B 97400 40
        牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin 66200 40
        兔肌動蛋白/Rabbit actin 43000 40
        牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase 31000 40
        胰蛋白酶抑制劑/Trypsin inhibitor 20100 40
        雞蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme 14400 40
        本產品規(guī)格:凍干粉(20次/支)
        使用方法:
        1、 將凍干粉產品先加200ul重蒸水溶解,再加等體積的2倍樣品緩沖液混勻。在沸水浴中變性3-5分鐘,分裝20ul/支,入-20℃保存。使用時取一支即可上樣。
        2、 應經常規(guī)SDS-PAGE電泳后,用考馬斯亮藍R-250或G-250(coomassie blue R-250 or G250)染色。可得分布均勻、密度相同的6個蛋白質條帶
        3、 銀染法:將本品以1倍樣品緩沖液稀釋40-50倍后分裝(8ul/支)、-20℃保存。使用前取一支,100℃水浴3-5分鐘即可上樣。經常規(guī)SDS-PAGE后銀染,可得分布均勻的6個蛋白質條帶。
        建議使用分離膠:14%(T)。
        表-2倍樣品緩沖液配制:
        試劑名稱 成分 含量/濃度 配制方法
        2倍樣品
        緩沖液 0.5M Tris-HCI,PH6.8 2.0ml 以上溶液混合后加雙蒸水2.5ml至10.0ml,可適當調整溴酚藍的用量以保證電泳時的*指示
        丙三醇(甘油) 2.0ml
        20%SDS 2.0ml
        0.1%(w/v)溴酚藍 0.5ml
        2-b-巰基乙醇 1.0ml
        Reagents for SDS Gels
        A. 4×Lower gel buffer pH8.8
        1.5M Tris 90.83g
        0.4%(w/v)SDS 2.00g
        dd H2O to 500ml
        用濃HC1調PH至8.8
        B. 4×Upper gel buffer pH6.8
        0.5M Tris 12.11g
        0.4%(w/v)SDS 0.8g
        dd H2O to 200ml
        用濃HC1調PH至6.8
        C. 30% Acrylamide regular
        29.2%(w/v)acrylamide 29.2g
        0.8%(w/v)Bis-acrylamide 0.8g
        dd H2O to 100ml
        加熱使acrylamide*溶解,冷卻后加Bis混合溶解后定容,用濾紙過濾,裝棕色瓶
        D. 10×Running buffer
        0.25M Tris 30.3g
        1.92M Gly 144.1g
        1.0%(w/v)SDS 10.0g
        dd H2O to 100ml
        (無需調PH)PH即為8.2-8.3

        分離膠 總體積12ml 單位:ml 濃縮膠
        5% 7% 10% 11.5% 12% 13.5% 14% 15% 5%
        dd H2O 7 6.2 5 4.4 4.2 3.6 3.4 3 dd H2O 4.06
        4×lower 3 3 3 3 3 3 3 3 4×Up 1.68
        30%Acr 2 2.8 4 4.6 4.8 5.4 5.6 6 30%Acr 1
        100%TEMED 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 10ul 100%TEMED 5ul
        10%AP 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 10%AP 50ul
        附圖一:SDS-PAGE 低分子量標準蛋白質考馬斯亮藍R-250染色結果

        兔磷酸化酶B 97400道爾頓

        牛血清白蛋白 66200道爾頓

        兔肌動蛋白 43000道爾頓

        牛碳酸酐 31000道爾頓

        胰蛋白酶抑制劑 20100道爾頓

        雞蛋清溶菌 14400道爾頓