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        連接scFv和載體DNA并轉化大腸桿菌,構建scFv突變文庫

        更新時間:2013-01-14點擊次數(shù):1359

        [方法]
        1.配制1個50ul連接混合液,包含:
        ● 10×連接緩沖液,5uI
        ● 水,16ul
        ● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
        ● VcoI和NotI消化的scFv文庫(100g/ul), 7ul
        ● T4 DNA連接酶(400U/ul),2ul
        2.16℃孵育反應液過夜。
        3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗滌沉淀1次。
        4.重懸DNA于10ul水中。
        5.用4份相同的2.5ul的DNA分別電轉化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞中。
        6.確定文庫容量,并將菌文庫材抖儲存于-70℃。

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